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小鼠环氧合酶2£¨COX-2£©ELISA试剂盒分析说明书

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资料简介

本试剂盒用于体外定量检测血清¡¢血浆¡¢组织¡¢细胞上清及相关液体样本中小鼠环氧合酶2£¨COX-2£©的含量¡£
?#34892;?#26399;£º6个月
保存条件£º2-8¡æ
本试剂盒仅供体外研究使用£¬不用于临床诊断
 
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验£¨ELISA£©¡£往预先包被小鼠环氧合酶2£¨COX-2£©捕获抗体的包被微孔中£¬?#26469;?#21152;入标本¡¢标准品¡¢HRP标记的检测抗体£¬经过温育并彻底洗涤¡£用底物TMB显色£¬TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色£¬并在酸的作用下转化成最终的黄色¡£颜色的深浅和样?#20998;械?#23567;鼠环氧合酶2£¨COX-2£©?#25910;?#30456;关¡£用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度£¨OD 值£©£¬计算样品浓度¡£
 
样本处理及要求
1.  血清£º全血标本请于室温放置2小时或4¡æ过?#36141;?#20110;1000g离心20分钟£¬取上清即可检测£¬或将标本放于-20¡æ或-80¡æ保存£¬但应避免反复冻融¡£
2.  血浆£º可用EDTA或肝素作为抗凝剂£¬标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟£¬或将标本放于-20¡æ或-80¡æ保存£¬但应避免反复冻融¡£
3.  组织匀浆£º用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织£¬去除残留血液£¨匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果£©£¬称重后将组织剪碎¡£将剪碎的组织与对应体积的PBS£¨一般按1:9的重量体积比£¬?#28909;?g的组织样品对应9mL的PBS£¬具体体积可根据实验需要?#23454;?#35843;整£¬并做好记录¡£推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂£©加入玻璃匀浆器中£¬于冰上充分?#24515;¥¡?#20026;了进一步裂解组织细胞£¬可以对匀浆?#33322;?#34892;超声破碎£¬或反复冻融¡£最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟£¬取上清检测¡£
4.  细胞培养物上清或其它生物标本£º1000g离心20分钟£¬取上清即可检测£¬或将标本放于-20¡æ或-80¡æ保存£¬但应避免反复冻融¡£
注£º标本溶血会影响最后检测结果£¬因此溶血标本不宜进行此项检测¡£

标本处理
1.  本公司?#27426;?#35797;剂盒本身负责£¬?#27426;?#22240;使?#37238;?#35797;剂盒所造成的样本消耗负责£¬请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量£¬预留充足的样本¡£
2.  实验前应预测标本含量£¬如果标本浓度过高£¬应?#21592;?#26412;进行稀释£¬使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围£¬计算时再乘以相应的稀释倍数¡£标本使用0.01mol/L的PBS稀释(PH=7.0-7.2)¡£
3.  若所检样本不包含在说明书所列样本之中£¬建议进行预实验验证其?#34892;?#24615;£¬并注意留存样本¡£
4.  使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差¡£
5.  若样本为细胞培养上清£¬因该类样本干扰因素较多£¬如?#21512;?#32990;状态¡¢细胞数量¡¢采样时间等£¬所以可能存在检测不出的情况¡£
6.  某些天然蛋白或重组蛋白£¬包括原核及真核重组蛋白£¬可能因为与本产品所使用的检测抗体?#23433;?#33719;抗体不匹配£¬而不被检测出¡£
7.  建议使用新鲜样本£¬保存时间过长可能会存在蛋白?#21040;?#25110;变性导致实验结果偏差¡£
 
需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪£¨450nm£©
2. 高精度加样器及枪头£º0.5-10uL¡¢2-20uL¡¢20-200uL¡¢200-1000uL
3. 37¡æ恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水
 
试剂盒组成
名称
96孔配置
48孔配置
备注
微孔酶标板
8孔×12条
8孔×6条
标准品
0.3mL*6管
0.3mL*6管
样本稀释液
6mL
3mL
检测抗体-HRP
10mL
5mL
20×洗涤缓冲液
25mL
15mL
按说明书进行稀释
底物A
6mL
3mL
底物B
6mL
3mL
终止液
6mL
3mL
封板膜
2张
2张
说明书
1份
1份
自封袋
1个
1个
£º
1.  标准品浓度?#26469;?#20026;£º160¡¢80¡¢40¡¢20¡¢10¡¢0 U/L
2.  经过大?#31354;?#24120;标本检验£¬标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内£¬实验过?#35752;?#30452;接取50μL样本上样即可¡£当有部分样本值超过最大标准品浓度时£¬可用样本稀释?#33322;?#26631;本进行?#23454;?#31232;释后再进行实验¡£
 
注意事项
1. ?#32454;?#25353;?#23637;?#23450;的时间和温度进行温育?#21592;?#35777;准?#26041;?#26524;¡£所有试剂?#24613;?#39035;在使用?#25353;?#21040;室温20-25¡æ¡£使用后立即冷藏保存试剂¡£
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果¡£在加入底物前确保尽量吸干孔内液体¡£温育过?#35752;?#19981;要让微孔干燥掉¡£
3. 消除板底残留的液体和手指印£¬否则影响OD值¡£
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色£¬已经变蓝的底物液不能使用¡£
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果¡£
6. 在储存和温育时避免?#25239;?#30452;接照射¡£
7. ?#33014;?#33267;室温后再打开密封袋以?#28010;®µ文?#32858;在冷板条上¡£
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体¡£任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性¡£
9. 不能使用过期产品¡£
10. 如果可能传播疾病£¬所?#26800;?#26679;品都应管理好£¬按?#23637;?#23450;的程序处理样品和检测装置¡£
 
试剂准备
试剂盒从冷藏环?#25345;?#21462;出应在室温?#33014;?#21518;方可使用¡£
20×洗涤缓冲液的稀释£º蒸馏水按1£º20稀释£¬即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水¡£
 
操作步骤
1.  从室温?#33014;?0min后的铝箔袋中取出所需板?#37232;?#21097;余板条用自封袋密封放回4¡æ¡£
2.  设置标准品孔和样本孔£¬标准品孔各加不同浓度的标准品50μL£»
3.  样本孔中加入待测样本50μL£»空白孔不加¡£
4.  除空白孔外£¬标准品孔和样本孔中每?#20934;?#20837;?#22791;?#36807;氧化物酶£¨HRP£©标记的检测抗体100μL£¬用封板膜封住反应孔£¬37¡æ水浴锅或恒温箱温育60min¡£
5.  弃去液体£¬吸水纸上拍干£¬每?#20934;?#28385;洗涤液£¨350μL£©£¬静置1min£¬甩去洗涤液£¬吸水纸上拍干£¬如此重复洗板5次£¨?#37096;?#29992;洗板机洗板£©¡£
6.  每?#20934;?#20837;底物A¡¢B各50μL£¬37¡æ避光孵育15min¡£
7.  每?#20934;?#20837;终止液50μL£¬15min内£¬在450nm波长处测定各孔的OD值¡£
 
实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标£¬标准品的浓度值为纵坐标£¬在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线£¬并得到直线回归方程£¬将样品的OD值代入方程£¬计算出样品的浓度¡£
 
试剂盒性能
1.  检测范围£º5 U/L – 160 U/L¡£
2.  灵敏度£º最低检测浓度小于1.0 U/L¡£
3.  特异性£º不与其它可溶性结构类似物交叉反应¡£
4.  重复性£º板内变异系数小于10% £¬板间变异系数小于15% ¡£
 
说明
1.  由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析£¬本产品可能存在?#27426;?#30340;质量技术风险¡£
2.  最终的实验结果与试剂的?#34892;?#24615;¡¢实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关£¬请务必准备充足的标本备份¡£
3.  不同批次的同一产品可能会有少许差别£¬如£º检测限¡¢灵敏度以及显色时间等£¬请依据试剂盒内说明书进行实验操作£¬网站电子版说明书仅作参?#32908;?/span>
4.  只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果£¬不能混用其他制造商的产品¡£只有?#32454;?#36981;守本试剂盒的实验说明才会得到最佳的检测结果¡£
 
问题解答
若实验效果不好£¬请及时对显色结果拍照£¬保留所用板条及未使用试剂£¬并妥善保存£¬然后联系我公司技术支持为您解决问题¡£同时您?#37096;?#20197;参?#23478;?#19979;资料£º
问题
可能原因
解决方案
标准曲线差
吸取及洗涤不充分
充分的吸取及洗涤
移液不精确
检查和校正移液器
精密度低
洗涤不充分
按说明书要求充分洗涤和浸泡
混匀不充分和吸取试剂不足
充分混匀和吸取试剂
重复利用吸头¡¢容器和?#26448;?/span>
使用加样器要更换新的吸头¡¢使用新的容器和?#26448;?/span>
加样不精确
检查和校正移液器
O.D值低
每?#20934;?#30340;试剂量不精确
校正移液器£¬精确加入试剂
温育时间不正确
保证充足的温育时间
温育温度不正确
试剂要?#33014;?#33267;室温并保证准确的温育温度
酶标记物或底物失效
通过混合酶标记物和底物£¬颜色应迅速显现来检查
没有加入终止液
按照说明书实验操作步骤加入终止液
超出读数时间读数
在说明书推荐的读数时间内读数
样本值
不正确的样本储存方式
正?#21453;?#23384;样本£¬使用新鲜样本进行实验
不正确的样本收集和处理方法
采取正确的样本收集和处理方法
待测物?#35797;?#26679;本中含量低
使用新鲜样本£¬重复实验
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